小麦粉中间苯二酚的测定 高效液相色谱法（BJS 202009）解读

　　一些不法商贩在利益驱使下向小麦粉中添加非食品原料以达到防腐增白等目的，此类事件对消费者的安全健康构成风险，同时也造成了恶劣的社会影响。间苯二酚就是其中一种被严令禁止加入小麦粉中的非法添加物。
什么是间苯二酚
　　间苯二酚（英文名Resorcinol）是苯间位两个氢被羟基取代后形成的化合物，主要用于橡胶黏合剂、合成树脂、染料、防腐剂、医药和分析试剂等方面，其为许多偶氮染料、毛皮染料的中间体，也是医药中间体对氮基水杨酸的原料。此外，该物质还具有杀菌作用，可用作防腐剂，添加于化妆品和皮肤病药物糊剂及软膏等。间苯二酚能刺激皮肤、黏膜，同时可经皮肤迅速吸收，生成高铁血红蛋白而引起发绀、昏睡和致命的肾脏损伤。长期低浓度接触，可引起呼吸道刺激症状职业性皮肤损害。
　　根据原食药监总局《关于进一步加强小麦粉质量安全监管的公告》（2017年第132号），取得“小麦粉（通用）”生产许可的企业，不得在小麦粉中添加任何食品辅料；严禁生产企业在小麦粉中添加过氧化苯甲酰、次磷酸钠、硫脲、间苯二酚、过硫酸盐、噻二唑、曲酸等非食品原料。本补充检验方法可为市场监管部门对小麦粉生产企业的监管提供技术手段，也为食品企业在原料进货查验、小麦粉出厂检验等环节提供可靠的检验方法。
方法概述
　　液相色谱法是一种被广泛用于各种有机化合物分离分析的方法，能在较低温度下将间苯二酚与各种干扰物分离开，从而更准确地进行定量。所以本方法采用液相色谱法测定小麦粉中的间苯二酚含量，称取5g试样加入15mL甲醇涡旋混匀，超声提取15min，放置至室温后加入1mL亚铁氰化钾溶液和1mL乙酸锌溶液沉淀蛋白，定容混匀后离心，取上清液过有机相滤膜，待液相色谱测定。采用液相色谱C18-Amide柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
操作要点
　　本方法前处理比较简单，但是仍有以下几点需要注意：
　　标准物质在分析方法中的定性定量作用至关重要，由于间苯二酚标准物质易吸潮且见光易氧化，所以需在密封干燥且避光的条件下保存，标准溶液的保存需要冷冻避光。间苯二酚还有两种同分异构体邻苯二酚和对苯二酚，虽然本方法考察了同分异构体对目标物的干扰情况，发现在本方法建立的流动相条件下，三种同分异构体能有效分离，但在购买时仍需加以区分。
　　间苯二酚易溶于水、甲醇、乙醚等溶剂。首先排除乙醚等易挥发且对人体伤害比较大的溶剂作为提取剂后，由于小麦粉为高淀粉基质，若直接以水为提取剂，样品的分散性较差，回收率较低。实验分别以不同比例的甲醇/水为提取剂，比较不同提取剂的提取效率，间苯二酚的提取率随甲醇浓度增高而增高，当甲醇比例到达80%后，提取率趋于稳定。由于样品吸水性较强，从精准定量的角度，选择纯甲醇为最优的样品提取剂。
　　考察前处理沉淀剂对目标物回收率及净化效果的影响，结果发现，加与不加亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀剂对回收率及目标物的特异性均无明显差异。但是，不经沉淀处理的样品溶液在冷藏或长时间放置后会析出沉淀物，不利于批量样品的同时测定；而经沉淀处理的样品溶液不因放置时间的长短而出现沉淀物。因此，批量测定时，在不能保证立即进行仪器分析的情况下，加入沉淀剂可保证溶液在冷藏条件下能够较长时间保持澄清透明。
　　间苯二酚是一种既有紫外吸收又有荧光响应的物质，本方法对其检测时选用的是荧光检测器。相对于紫外检测器，荧光检测器具有更强的选择性和更高的灵敏度，能更有效地减少干扰物的影响，同时提高定性定量的可靠性。方法操作简单、灵敏度高、选择性好、检出限低，适用于小麦粉中痕量间苯二酚的定性、定量检测。

□山东省食品药品检验研究院 别 梅