食品中柑橘红2号的测定（BJS 201912）解读

　　柑橘红2号跟苏丹红一样，是一种禁止用于食品中的偶氮类工业染料。2004年，部分地区的“染色橙”等柑橘类水果中被发现违法使用柑橘红2号，此类偶氮染料因而被广泛关注。该补充检验方法的发布旨在为严厉打击此类非法添加行为提供技术支持。

研制背景
　　柑橘红2号跟苏丹红一样，是一种亲脂性偶氮类化工合成染色剂，在柑橘中主要作为染色剂使用，其目的是增加甜橙（主要是脐橙）果实的红色色泽与着色均匀度，提高果实的市场竞争力，用其染色后的食品颜色非常鲜艳且不易褪色。一些不法商贩为了使劣质食品外观更加美观，牟取暴利，违规对其染色。
　　2017年，世界卫生组织国际癌症研究机构公布致癌物清单，柑橘红2号在2B类致癌物质清单中，被认为具有致癌危险，对人体的肝脏、肾脏器官具有明显的毒副作用。欧盟和日本等地禁用此类色素；美国食品药物管理局明确规定，经合适溶剂溶解后的柑橘红2号色素，仅限用于不打算加工的早熟甜橙果皮增色，而且使用后果实表皮不得残留挥发性溶剂，全果中柑橘红2号色素最大残留量不得超过2 mg/kg（百万分之二）。在我国，GB 2760《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对柑橘红2号作为食品添加剂使用未作表述，即柑橘红2号不能作为食品添加剂使用，为非食用物质。在食品中添加非食用物质是严重危害人民群众饮食安全的犯罪行为，需建立相关食品中柑橘红2号的检测方法，为严厉打击此类非法添加行为给予技术支持。

方法简介
　　BJS 201912适用于柑橘类水果、果酱、蜜饯、果汁饮料、辣椒油、辣椒酱、火锅底料、肉制品中柑橘红2号的测定。可以看出，食品种类主要覆盖一些涉“橙”、涉“红”食品，选择的主要依据是通过分析柑橘红2号染色特性，确定了市面上易掺入柑橘红2号染料的高消费量食品，包括已报道的被非法添加的食品（柑橘类水果）、存在风险的下游产品（蜜饯、果酱、果汁饮料）和可能被非法添加的样品（辣椒酱、火锅底料、辣椒油、肉制品），较全面地覆盖了可能涉及非法添加的食品。
　　已报道的柑橘红2号的测定方法有液相色谱法和液相色谱-质谱联用法。液相色谱法存在灵敏度低、复杂基质抗干扰能力差等缺陷，无法满足痕量检测的准确定性定量要求。液相色谱-质谱联用法因高灵敏度、高选择性及定量定性准确等特性，成为目前此类禁用物质的最佳检测方法。柑橘红2号不溶于水，具有亲脂性，不同食品基质中含水量、含油脂量差异很大，这给柑橘红2号的提取和净化带来了较大挑战。通过深入分析柑橘红2号的结构及理化性质，研究人员最终摸索优化出利用离子浓度差异提高提取效率、利用正相固相萃取原理达到净化目的方法。本方法为试样用乙腈提取，氯化钠盐析，经氨基固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。该方法简便、快捷、高效、灵敏度高，适用于包括高水量和高油量、固体和液体、动物源性和植物源性等多种差异较大食品基质类型。

技术要点
　　经方法学验证，本方法适用于柑橘类水果的全果检测。但是基于柑橘红2号的染色功能，渗透试验检测结果发现染色后，柑橘红2号主要集中于果皮部分，为提高问题发现率，本方法只检测果皮部分。
　　考虑到柑橘红2号的亲脂特点和各种食品基质复杂性，采用乙腈提取、氯化钠盐析，一方面可以有效提高高油脂样品中偶氮染料的提取效率，有效去除杂质，共萃取物较少；另一方面对于含水较多的样品，盐析的作用可以促进目标物进入乙腈层。
　　鉴于对基质效应的考察，本实验采用基质标准溶液校正曲线来定量，以减少基质干扰对结果的影响。
　　起草时的检出限比方法最终规定的检出限更低，但考虑到使用时具有一定染色效果的添加量及方法推广时各实验室仪器的灵敏度要求，本方法最终确定的检出限有适当提高。
　　流动相中加入0.1%甲酸可以提高柑橘红2号的离子化效率，较好地改善峰形。
　　因非法添加剂量随意性很大，样品中含量可能超过定量限数倍，也可能为痕量级别。因此，方法中规定，试样溶液可根据实际浓度适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。应注意的是，如稀释后浓度过低，可导致假阴性；而浓度过高，则会对仪器造成污染，造成后续样品的假阳性。建议检测可疑样品时，稀释倍数应从高往低，并同时做好空白等质控实验，保证结果的准确性。另外，对于高浓度阳性样本，经验证可适当稀释，不影响结果的准确度。

操作注意事项
　　柑橘红2号不同来源标准品的盐根可能不同，CAS号不同，但不影响质谱检测，但要注意其纯度要求。
　　方法提供的监测离子对等测定条件为推荐条件，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作适当调整；在样品基质有测定干扰的情况下，可选用其他监测离子对。
　　方法学验证中的准确度实验需符合GB/T 27404-2008要求，对于禁用物质，应在定量限、两倍定量限和十倍定量限进行三水平加样试验，回收率范围见GB/T 27404-2008附录F。
　　柑橘红2号在常见C18色谱柱上均能有效保留和分离，HSS T3等保留能力过强的色谱柱容易残留，且色谱柱越长溶剂损耗越多，建议选择与推荐色谱柱保留能力相当的色谱柱。

方法应用
　　BJS 201912的发布实施，为柑橘红2号非法添加行为的监管提供了技术支持，现已列入国家食品安全抽检监测计划，在全国食品安全抽检监测工作中广泛应用。此外，一方面考虑食品工业的迅速发展，食品类别不断增加，适用食品类别可能需要进一步扩充；另一方面为提高检测效率及适应监管的更高要求，可考虑在检测范围中增加同类别偶氮类或相同色泽用途的非法染料。综合考虑可进一步建立多种该类非法染料的通量检测方法，或深入挖掘未知同类非法染料的高分辨筛查方法。

□山东省食品药品检验研究院 张艳侠